Тест-системы E. coli Latex Test Kit

Авторизация

Тест-системы E. coli Latex Test Kit

PN 541000 E. coli O26 Latex Test Kit
PN 541010 E. coli O45 Latex Test Kit
PN 541020 E. coli O103 Latex Test Kit
PN 541060 E. coli O104:H4 Latex Test Kit
PN 541030 E. coli O111 Latex Test Kit
PN 541040 E. coli O121 Latex Test Kit
PN 541050 E. coli O145 Latex Test Kit
PN 541070 E. coli O157:H7 Latex Test Kit

Тест-системы E. coli Latex Test Kit предназначены для идентификации E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145, а также E. coli O157:H7 методом латекс-агглютинации.

Кишечная палочка (Escherichia coli, E. coli) – грамотрицательная бактерия, факультативный анаэроб. Она присутствует в кишечнике почти всех видов млекопитающих, включая и человека. Некоторые серовары E. coli полезны для носителя. Они выполняют барьерные функции: не дают патогенным микроорганизмам развиваться в кишечнике хозяина, участвуют в синтезе витаминов, частично расщепляют клетчатку.  Однако существуют и патогенные серовары кишечной палочки.

Среди патогенных кишечных палочек следует отметить энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП, или STEC – от Shiga-toxin-producing Escherichia coli). Они вырабатывают шигеллоподобный токсин и вызывают заболевания типа дизентерии. Для таких заболеваний характерна геморрагическая диарея, а в тяжелых случаях – гемолитико-уремический синдром (ГУС). Из этих патогенных кишечных палочек наиболее известна E. coli O157:H7. Однако существуют и другие серовары, заражение которыми также может приводить к тяжелым интоксикациям в том числе, с летальным исходом: это E. coli O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121 и O145.

Эти бактерии входят в состав нормальной микрофлоры кишечника крупного рогатого скота. С навозом они могут попадать на овощи, фрукты, зелень или же в воду, соки или молоко, а затем – в организм человека. Заражение возможно и при употреблении в пищу загрязненных продуктов из говядины, особенно не подвергавшихся термообработке. Инфекция также может передаваться от человека к человеку при контакте, особенно при использовании общей посуды. Известно, что E. coli O157:H7 способна до 4 суток выживать на различных поверхностях.

Методы реакции латекс-агглютинации (РЛА) для определения E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145, а также O157:H7 были разработаны в 2011 году в. Для реализации этих реакций применяются микросферы латекса, связанные с антителами (иммуноглобулином G) к одному из соответствующих сероваров. При контакте комплекса латекс-антитело с сероваром кишечной палочки, содержащим соответствующий антиген, антитела соединяются с антигеном, и в течение одной минуты происходит их агглютинация. Другие бактерии, включая и иные серовары E. coli, не имеют этих антигенов, следовательно, агглютинация не произойдет.

Метод РЛА не только точен, но и прост: агглютинация видна невооруженным глазом.

http://www.stylab.ru/netcat_files/userfiles/Files/Latex_agglutination.JPG

В ходе проверки методики ее надежность и чувствительность сравнивали с методами иммуномагнитной сепарации (IMS/ИМС) и твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA/ИФА). Результаты показали, что агглютинация комплекса латекс-антитело происходит при соединении с соответствующими колониями E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 и O157:H7. При контакте с бактериями иных сероваров реакция не происходит. Это означает, что метод специфичен и пригоден для качественного анализа.

Метод РЛА лучше всего подходит для колоний E. coli, выращенных на модифицированном агаре RBA (mRBA) или триптон-соевом агаре с добавлением 5% овечьей крови. Его не следует применять для суспензий колоний или в жидкой среде: в этом случае антитела не смогут соединиться с антигенами и реакция будет отрицательной даже в присутствии E. coli данных сероваров.

Форма:

Каждая тест-система рассчитана на 50 измерений.

  1. Отрицательный контроль. Суспензия инактивированной E. coli K12 в буфере, 1 пробирка, 0,5 мл.
  2. Положительный контроль. Суспензия инактивированной E. coli выбранного серовара: O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 или O157:H7 в буфере, 1 пробирка, 0,5 мл.
  3. Фосфатный буфер (PBS), 1 пробирка, 1 мл.
  4. Реактив латекс-антитело. Суспензия частиц красного латекса, соединенного со специфичным к выбранному серовару E. coli: O26, O45, O103, O111, O121 или O145 IgG кролика. 1 пробирка с серой крышкой, 1,5 мл (рассчитана на 50 проб).
  5. Контрольный реактив латекса. Суспензия частиц красного латекса с иммуноглобулином пресенсибилизированного кролика. 1 пробирка с красной крышкой, 1,0 мл.
  6. Контрольные карты. Одноразовые карты, 5 штук на 10 реакций каждая.
  7. Аппликаторы (100 шт).
  8. Цветокодированные пипетки (всего 20 шт): зеленые (10), синие (5), красные (5).
  9. Инструкция.

Затраты времени:

Анализ: 2-5 минут.

Схема проведения реакции латекс-агглютинации при тестировании на E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 и O157:H7

  1. Довести реактивы и пробы до комнатной температуры. Перемешать суспензии латекса и контрольные реактивы, встряхнув пробирки.
  2. Пипеткой, входящей в комплект (зеленой) нанести одну каплю фосфатного буфера (PBS) в 1 (один) круг на контрольной карте. При анализе нескольких проб использовать дополнительные круги на контрольной карте.
  3. Аппликатором или петлей взять пробу с исследуемой колонии и тщательно перемешать в капле фосфатного буфера в одном из кругов.
  4. Пипеткой, входящей в комплект (красной) внести 1 (одну) каплю положительного контроля во второй круг.
  5. Пипеткой, входящей в комплект (синей) внести 1 (одну) каплю отрицательного контроля в третий круг.
  6. Внести 1 (одну) каплю (держа пипетку вертикально) коньюгата латекса с антителом к анализируемому серотипу E.coli в каждый круг (положительный контроль, отрицательный контроль, пробы).
  7. Осторожно вращать контрольную карту круговыми движениями, так, чтобы капли совершали полный оборот в трех плоскостях в течение 1 (одной) минуты или до агглютинации (в зависимости от того, что произойдет раньше). Записать результат.
  8. Если агглютинировали контрольные реактивы, провести проверку новой пробы из колонии с контрольным реактивом латекса, чтобы убедиться, что изолят не является аутоагглютинирующим штаммом.

Примечание. Все аппликаторы, контрольные карты, прочие материалы и инструменты после использования дезинфицировать или автоклавировать.

Интерпретация результатов

Агглютинация латекса в течение 1 минуты – положительный результат. Это означает наличие кишечной палочки анализируемого серовара. Отсутствие агглютинации в течение 1 минуты – отрицательный результат. Это означает отсутствие кишечной палочки анализируемого серовара.